通用名稱：非洲豬瘟病毒野毒株、疫苗株雙重?zé)晒釶CR核酸檢測試劑盒

英文名稱：Dual Fluorescence PCR detection Kit for wild and vaccine strains of African swine fever virus

用于非洲豬瘟病毒野毒株和疫苗株的鑒別檢測；適用于豬血液、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、腎臟、肌肉等樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

基線及閾值設(shè)定:根據(jù)儀器自動分析結(jié)果。如果曲線發(fā)生異常時，調(diào)整基線，起始值一般可在 3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，終止值一般可在 5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)；閾值：根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過陰性對照品擴增曲線的最高點，且相交于陽性對照擴增曲線進入指數(shù)增長期的拐點。每個樣品反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)即為Ct值。

1. 試劑盒有效性判定

陽性對照在FAM和VIC通道均有典型擴增曲線且Ct值≤35，且陰性對照在FAM和VIC通道均無Ct值、無擴增曲線，則試驗結(jié)果有效；否則，此次試驗視為無效。

2. 被檢樣本結(jié)果判定

（1）當(dāng)待檢樣品僅FAM通道出現(xiàn)典型擴增曲線且Ct值≤40，VIC通道無擴增曲線時，判定為非洲豬瘟野毒株核酸陽性，非洲豬瘟病毒疫苗株核酸陰性。

（2）當(dāng)待檢樣品FAM、VIC通道均出現(xiàn)典型擴增曲線且Ct值≤40時，判定為非洲豬瘟病毒疫苗株核酸陽性。

（3）當(dāng)待檢樣品FAM、VIC通道均無擴增曲線且無Ct值時，判為非洲豬瘟野毒株核酸、疫苗株核酸均為陰性。

（4）當(dāng)待檢樣品VIC通道出現(xiàn)典型擴增曲線且有Ct值，而FAM通道無擴增曲線時，可能是操作過程中樣品受到污染所致，應(yīng)重新提取樣品核酸再次檢測。若檢測結(jié)果仍為VIC通道出現(xiàn)典型擴增曲線且有Ct值，F(xiàn)AM通道無擴增曲線，則判定為非洲豬瘟野毒株、疫苗株核酸陰性。

1. 為確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議先使用非洲豬瘟病毒核酸熒光PCR檢測試劑對樣本核酸進行檢測，選擇FAM通道Ct值≤30的樣品用本試劑盒進行非洲豬瘟病毒疫苗株的鑒別檢測。

2. 實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行，在操作過程中對時間、試劑體積等精確控制可以獲得最好的結(jié)果。

3. 實驗室應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理，依照配液區(qū)→模板提取區(qū)→擴增區(qū)→分析區(qū)順序進行基因檢測。各區(qū)間人員、器材、試劑及空氣流向應(yīng)有嚴(yán)格要求。

4. 核酸提取有關(guān)耗材確保潔凈、無DNase/RNase，提取過程盡量低溫、快速，完成后進入下一步實驗或凍保。

5. 對于頂部采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋，對于底部采光儀器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。

6. 凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下完全融化，瞬時離心使液體完全沉于管底。避免反復(fù)凍融，以免影響試劑性能。

7. 樣品、陽性對照等在使用后及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽性。

8. 擴增產(chǎn)物禁止開蓋，實驗產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時收集，遠離PCR實驗室進行無害化處理。