通用名稱：非洲豬瘟病毒野毒株、疫苗株雙重熒光PCR核酸檢測試劑盒

英文名稱：Dual Fluorescence PCR detection Kit for wild and vaccine strains of African swine fever virus

FAM信號通道用于檢測非洲豬瘟P72特異性基因；VIC/HEX信號通道用于檢測豬源特異性管家基因，不與牛肉、羊肉、雞肉、人汗液、唾液發(fā)生特異性反應，用于質(zhì)控采集樣本中是否含有豬源核酸，從而判斷樣本采集過程是否標準，洗消是否徹底及員工是否食用豬肉制品；本品可以用于豬血液、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、腎臟、肌肉等樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

基線及閾值設定:根據(jù)儀器自動分析結(jié)果。如果曲線發(fā)生異常時，調(diào)整基線，起始值一般可在 3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，終止值一般可在 5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)；閾值：根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過陰性對照品擴增曲線的最高點，且相交于陽性對照擴增曲線進入指數(shù)增長期的拐點。每個樣品反應管內(nèi)的熒光信號到達設定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)即為Ct值。

1. 試驗有效性判定

陽性對照在FAM通道和VIC（或HEX）通道均有典型擴增曲線且Ct值≤35；陰性對照在FAM和VIC通道均無Ct值且無擴增曲線；則試驗結(jié)果有效；否則，此次試驗視為無效。

2. 樣品判定

（1）當待檢樣品FAM通道出現(xiàn)典型擴增曲線且Ct值≤45時，判定為非洲豬瘟病毒核酸陽性； 無Ct值或無典型擴增曲線，則判為非洲豬瘟病毒核酸陰性。

（2）當待檢樣品VIC（或HEX）通道出現(xiàn)典型擴增曲線且Ct值≤45時，判定為樣品豬源核酸成分陽性；無Ct值或無典型擴增曲線，則判為豬源核酸成分陰性。

1. 本試劑盒陽性對照為含有非洲豬瘟P72基因靶標及豬源內(nèi)參管家基因靶標的假病毒，假病毒較質(zhì)粒更不易形成氣溶膠污染，可以免核酸提取，直接加PCR反應液里面進行擴增質(zhì)控；另一方面，假病毒也可以參與核酸提取步驟，用于質(zhì)控提取試劑盒提取效率，在參與提取時，取10 ?l陽性對照+190?l無核酸酶水，作為樣品參與提取，應嚴格規(guī)范操作，防范交叉污染。

2. 本試劑盒為超敏感體系，若樣品中含有豬源樣本，可不必加陽性對照，VIC通道可用于擴增反應體系質(zhì)控。試驗人員需經(jīng)過嚴格培訓。在操作過程中對時間、試劑體積等精確控制可以獲得最好的結(jié)果。

3. 實驗室應嚴格按照有關規(guī)定分區(qū)管理，依照配液區(qū)→模板提取區(qū)→擴增區(qū)→分析區(qū)順序進行基因檢測。各區(qū)間人員、器材、試劑及空氣流向應有嚴格要求。

4. 核酸提取有關耗材確保潔凈、無DNase/RNase，提取過程盡量低溫、快速，完成后進入下一步實驗或凍保。

5. 對于頂部采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋，對于底部采光儀器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。

6. 凍存試劑使用前應于室溫下完全融化，瞬時離心使液體完全沉于管底。避免反復凍融，以免影響試劑性能。

7. 樣品、陽性對照等在使用后及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽性。

8. 擴增產(chǎn)物禁止開蓋，實驗產(chǎn)生的廢棄物應及時收集，遠離PCR實驗室進行無害化處理。